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倒置荧光显微镜明场和暗场的成像方法讲解

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  今天小编给大家讲讲倒置荧光显微镜明场和暗场的成像方法:
 
  倒置荧光显微镜根据衬度形成的机制,对散射吸收像可以有两种成像方式:
 
  (一)明场成像法(BFI),即只让近轴区的透射电子柬通过物镜光阑,形成亮背景上的暗图形像。物镜光阑的孔越小,明场像的衬度越大;
 
  (二)暗场成像法(DFI),即只让部分大角度的散射束或晶体的某衍射束通过物镜光阑,而将透射束挡掉。这样形成的是暗背景上的亮图形像。这种暗场成像法可以提高图像的衬度,是一种重要的成像方法。
 
  倒置荧光显微镜实现暗场戊像的方法大致可分四种:
 
  (一)维持沿光轴垂直照明而移动物镜光阑;
 
  (二)利用倾斜照明而取在光轴方向的散射束,这称为中心暗场成像法(CDFI);
 
  (三)采用中心挡束而有环形透光区的物镜光阑;
 
  (四)用环形透光的聚光镜光闻和中心圆孔形的物镜光阑。
 
  这里第一种方法z简便,但利用的是远袖区中的电子成像,故像差大,图像质量不会很好。第二法可避免上述缺点,但荧光显微镜的物镜光阑接收到的只是一小部分散衍射电子,因此效率较低。又光阑的一侧经常受到大量电子轰击,容易造成非对称污染,从而影响图像质量。环形物镜光闲在这方面有所改进,但缺点是制作困难,且难以做到完全轴对称。鉴于对照明系统的要求相对放宽松,所以可采用z后一个方案,在聚光镜处加一个环形光阑,对样品作空心柬照明。这种装置的效果。它的图像分辨率可与明场像的接近,而衬度又大大提高。
 

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