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传统光学显微镜细胞化学原理

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显微镜细胞化学是利用特异的化学或生化反应在显微镜下对细胞的化学成份进行定性与定位分析的方法.显微镜细胞化学是在光镜细胞化学基础上发展起来的。所不同的是,偏光显微镜细胞化学反应的结果必须在所研究的化学成份的部位引起显微子密度的改变,这是由显微镜的成像原理所决定的。显微镜价格根据造成细胞中显微子密度变化的原因、可将显微镜细胞化学方法分为三类:

1.反应产物是不溶解的并且是高显微子密度的。数码显微镜在固定剂中加入草酸钠,能将细胞内的钙离子变为草酸钙沉5.2显微镜细胞化学样品制备的一般过程显微镜细胞化学样品制备包括以下主要步骤:(1)醛类固定;2)厚切片制备;(3)显微镜孵育;(4)饿酸后固定;(5)常规脱水、包埋、切片

显微镜孵育一步中孵育液的成份及孵育的条件随所研究的酶而有所不同,将在后面结合具体方法讨论。这里仅就(1), (2)两步作一点简要说明。为兼顾结构和酶活性的保存,显微镜细胞化学中多使用甲醛(由多聚甲醛制备)和戊二醛的混合固定剂,其具体浓度因所研究的酶而异,需要注意的是,市售戊二醛中含有杂质,用于显微镜细胞化学固定时应当纯化。纯化方法有真空燕馏,活性碳过滤,离子交换,Sephadex G-10分离等。也可使用市场上出售的专用于显微镜细胞化学的纯化戊二醛,这种戊二醛装于安瓶内,处于无氧条件下。样品于固定之后应制备成厚度约405m的切片,再进入孵育液,而不宜用组织块。这是因为组织块较大,孵育液成份不易浸透至其中心。而且各种孵育液成份扩散速度不同,由此可能导至组织中心部位的人工假象(反应产物的扩散和假阳性)。制备厚切片可使用振动切片机或微切片机(Microslicer )。下面介绍几种酶的显微镜细胞化学方法。淀下来,并在显微镜下显示为高显微子密度。

2.显微镜反应产物是不溶解的,经过显微镜样品制备中的常规锹酸固定可变为高显微子密度的.例如DAB可被细胞色素氧化酶所氧化而形成沉淀,并可被俄化,用于显示酶所在部位。

3。反应产物本身是可溶性的,需要在孵育液内加入俘获剂而使其沉淀并赋于其高显微子密度,多数显示酶的显微镜细胞化学方法属于此类。


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